Презентация «Хроматофокусирование: новые подходы в концентрировании и разделении»

Смотреть слайды в полном размере
Презентация «Хроматофокусирование: новые подходы в концентрировании и разделении»

Вы можете ознакомиться с презентацией онлайн, просмотреть текст и слайды к ней, а также, в случае, если она вам подходит - скачать файл для редактирования или печати. Документ содержит 48 слайдов и доступен в формате ppt. Размер файла: 2.23 MB

Просмотреть и скачать

Pic.1
Хроматофокусирование: новые подходы в концентрировании и разделении А. В. Иванов
Хроматофокусирование: новые подходы в концентрировании и разделении А. В. Иванов
Pic.2
Градиенты рН Доколоночные (внешние) - Только подвижные фазы - Необходимы смесители и т. д. [пример у
Градиенты рН Доколоночные (внешние) - Только подвижные фазы - Необходимы смесители и т. д. [пример узла установки “Waters ALC-100”, 1978 г. ]
Pic.3
Хроматофокусирование (ХФ) Метод ионообменной хроматографии, основанный на формировании линейного гра
Хроматофокусирование (ХФ) Метод ионообменной хроматографии, основанный на формировании линейного градиента рН внутри колонки (L. Sluyterman; Uppsala, 1979-81) объекты: биологические биполярные …
Pic.4
Техника хроматофокусирования (ХФ)
Техника хроматофокусирования (ХФ)
Pic.5
Фокусирующий эффект при разделении биполярных соединений (из книги “Хроматофокусирование полибуфером
Фокусирующий эффект при разделении биполярных соединений (из книги “Хроматофокусирование полибуфером на ПБИ”, Stockholm-Uppsala, 1982)
Pic.6
Преимущества хроматофокусирования не требуется дополнительное оборудование (градиентный насос, систе
Преимущества хроматофокусирования не требуется дополнительное оборудование (градиентный насос, система смесителей); высокая нагрузочная емкость колонок, концентрирование и разделение на одной …
Pic.7
Новые направления ХФ
Новые направления ХФ
Pic.8
1. Хроматофокусирование ионов переходных металлов Анионообменные сорбенты: PBE-94 (Pharmacia); кремн
1. Хроматофокусирование ионов переходных металлов Анионообменные сорбенты: PBE-94 (Pharmacia); кремнеземы (Силохром, Силасорб) с привитыми олигоэтиленаминами – En-, Dien-, Tetren-; AP- (аминопропил-) …
Pic.9
Комплексообразующие сорбенты для ХФ ионов металлов (впервые – нисходящие градиенты рН на карбоксильн
Комплексообразующие сорбенты для ХФ ионов металлов (впервые – нисходящие градиенты рН на карбоксильных сорбентах) [12 сорбентов]
Pic.10
Хроматофокусирование (ХФ) ионов металлов на анионообменных сорбентах сорбент - а) PBE-94; б) Tetren-
Хроматофокусирование (ХФ) ионов металлов на анионообменных сорбентах сорбент - а) PBE-94; б) Tetren-SiO2 (колонка 300х9 мм) СР - 25 мМ Трис-HCl (pH 7,5), Э - 1:8 Полибуфер-74 (pH 3,3), 1 мл/мин …
Pic.11
Разделение и концентрирование ионов металлов сорбент MacroPrep 50 CM (50 мкм, 50x4,6 мм) СР: 10 мМ Т
Разделение и концентрирование ионов металлов сорбент MacroPrep 50 CM (50 мкм, 50x4,6 мм) СР: 10 мМ Трис-HCl (pH 7,5), IСР: 0,1 (NaCl) Э: 0,5 мМ лимонная к-та (pH 3,4), IЭ: 0,1 (NaCl); 1 мл/мин …
Pic.12
Концентрирование ионов переходных металлов
Концентрирование ионов переходных металлов
Pic.13
Техника индуцирования: введение конц. индуцирующего раствора ИР (рН2) в поток разбавленного буферног
Техника индуцирования: введение конц. индуцирующего раствора ИР (рН2) в поток разбавленного буферного элюента Э (рН1) (K. Slais; Brno, 1992-94; А. Иванов, 1994-95)  сокращение времени в 3-4 раза
Pic.14
Разделение ионов металлов с индуцированным градиентом рН сорбент - а) Dien-SiO2 (100-120 мкм, 150х2
Разделение ионов металлов с индуцированным градиентом рН сорбент - а) Dien-SiO2 (100-120 мкм, 150х2 мм); б) Tetren-SiO2 ИР – 1 мл 100 мМ Na2B4O7, Э – а) 10 мМ (6-аминогексановая к-та + гистидин); 0,2 …
Pic.15
2. Новые простые подвижные фазы для хроматофокусирования Традиционно – полиамфолитные элюенты (“поли
2. Новые простые подвижные фазы для хроматофокусирования Традиционно – полиамфолитные элюенты (“полибуферы”) Преимущества: постоянная буферная емкость в широком диапазоне рН → широкий рабочий …
Pic.16
Подходы к поиску подвижных фаз – стартовых растворов и элюентов эмпирический - экспериментальная про
Подходы к поиску подвижных фаз – стартовых растворов и элюентов эмпирический - экспериментальная проверка смесей кислот, оснований и амфолитов – до 20 - 25 компонентов (Hutchens, 1985-86)
Pic.17
2. 1. Как избавиться от подъема рН на нисходящем градиенте? IЭ < IСР сорбент Tetren-SiO2 (7,5 мкм
2. 1. Как избавиться от подъема рН на нисходящем градиенте? IЭ < IСР сорбент Tetren-SiO2 (7,5 мкм, 1 мМ/г, 250x4,6 мм) СР: 25 мМ Трис-10 мМ H2C2O4 (pH 7,5), IСР: 1 - ~0; 2 - 0,1; 3 - 1 Э: 20 мМ …
Pic.18
Нисходящие градиенты рН в анионообменных колонках полифункциональные сорбенты с полиэлектролитными с
Нисходящие градиенты рН в анионообменных колонках полифункциональные сорбенты с полиэлектролитными свойствами; элюенты с минимальным содержанием слабых оснований; IЭ < IСР
Pic.19
Разделение изоформ плазминогенов сорбент Tetren-SiO2 (7,5 мкм, 50x4,6 мм) СР: 25 мМ Трис-HCl (pH 7,5
Разделение изоформ плазминогенов сорбент Tetren-SiO2 (7,5 мкм, 50x4,6 мм) СР: 25 мМ Трис-HCl (pH 7,5), IСР: 0,02 Э: 2 мМ H2C2O4 (pH 2,9), IЭ: ~0; 1 мл/мин Проба: 20 мкл лиофилизов. смеси Glu- и …
Pic.20
Разделение смеси металлов сорбент PBE-94 (>100 мкм, 300x9 мм) СР: 25 мМ Трис-HCl (pH 7,5), IСР: 0
Разделение смеси металлов сорбент PBE-94 (>100 мкм, 300x9 мм) СР: 25 мМ Трис-HCl (pH 7,5), IСР: 0,05 Э: 20 мМ глутаминовая к-та (pH 3,3), 1 мл/мин Детектирование - по реакции с ПАР (540 нм)
Pic.21
Эффект ионной силы подвижных фаз для карбоксильных колонок сорбент Macro-Prep 50 CM (50 мкм, 50x4,6
Эффект ионной силы подвижных фаз для карбоксильных колонок сорбент Macro-Prep 50 CM (50 мкм, 50x4,6 мм) СР: 10 мМ Трис-HCl (pH 7,5), Э: 1 мМ (1) и 0,5 мМ (2) лимонная кислота (pH 3,3 - 3,5); 1 …
Pic.22
Квази-линейные нисходящие градиенты рН в катионообменных колонках сорбенты с полиэлектролитными свой
Квази-линейные нисходящие градиенты рН в катионообменных колонках сорбенты с полиэлектролитными свойствами; слабое основание в элюенте не влияет на профиль градиента, а лишь на конечное значение рН; …
Pic.23
2. 2. Восходящие градиенты рН Мало изучены для применения в ХФ Подвижные фазы - полиамфолиты Эффект
2. 2. Восходящие градиенты рН Мало изучены для применения в ХФ Подвижные фазы - полиамфолиты Эффект ионной силы не исследован Перспективны для разделения белков, пептидов и др. биполярных макромолекул
Pic.24
Выбор элюента для восходящих градиентов рН сорбент Macro-Prep 50 CM (50 мкм, 50x4,6 мм) СР: 2 мМ лим
Выбор элюента для восходящих градиентов рН сорбент Macro-Prep 50 CM (50 мкм, 50x4,6 мм) СР: 2 мМ лимонная к-та (pH 3,3), Э (рН 7,5): 1:25 “Полибуфер” (1); 12,5 мМ Трис-HCl (2); 12,5 мМ Трис-HCl + 1 …
Pic.25
ХФ альбуминов с восходящим градиентом сорбент Macro-Prep 50 CM (50 мкм, 50x4,6 мм) СР: 2 мМ лимонная
ХФ альбуминов с восходящим градиентом сорбент Macro-Prep 50 CM (50 мкм, 50x4,6 мм) СР: 2 мМ лимонная к-та + 1,5 мМ Трис (pH 3,3), IСР: ~0 Э: 20 мМ Трис-HCl + 5 мМ лимонная к-та (рН 7,6); 1 мл/мин; …
Pic.26
ХФ образца формиатдегидрогеназы на сорбенте низкой емкости сорбент MN (5 мкм, 50x4,6 мм) СР: 2 мМ ли
ХФ образца формиатдегидрогеназы на сорбенте низкой емкости сорбент MN (5 мкм, 50x4,6 мм) СР: 2 мМ лимонная к-та (pH 3,0), IСР: 0,05 (NaCl) Э: 10 мМ Трис-лимонная к-та (рН 7,5); 1 мл/мин; IЭ: ~0 …
Pic.27
Квази-линейные восходящие градиенты рН в карбоксильных колонках 1. сорбенты с высокой емкостью: слаб
Квази-линейные восходящие градиенты рН в карбоксильных колонках 1. сорбенты с высокой емкостью: слабое основание в стартовом растворе влияет на начальный участок градиента рН; IЭ > IСР ( от 0,1) …
Pic.28
3. Хроматофокусирование пептидов на сульфокатионитах Возможность разделения пептидов Проблема: полиа
3. Хроматофокусирование пептидов на сульфокатионитах Возможность разделения пептидов Проблема: полиамфолитные элюенты осложняют детектирование ( < 220 нм) – только “ароматика” Отсутствие буферной …
Pic.29
Подвижные фазы для ХФ на сильно-кислотном сорбенте сорбент PRP-X200 (10 мкм, 200x4,6 мм) СР: 5 мМ Na
Подвижные фазы для ХФ на сильно-кислотном сорбенте сорбент PRP-X200 (10 мкм, 200x4,6 мм) СР: 5 мМ NaH2PO4 (pH 3,0), IСР: ~0 (1 и 2), 0,1 (3), 0,5 (4) Э: 10 мМ NaH2PO4 + 6 мМ Трис (рН 7,0), IЭ: ~0 (1 …
Pic.30
ХФ трипсинового гидролизата альбумина сорбент PRP-X200 (10 мкм, 200x4,6 мм) СР: 5 мМ NaH2PO4 (pH 3,0
ХФ трипсинового гидролизата альбумина сорбент PRP-X200 (10 мкм, 200x4,6 мм) СР: 5 мМ NaH2PO4 (pH 3,0), IСР: 0,5 (NaCl) Э: 10 мМ NaH2PO4 + 6 мМ Трис (рН 7,0), 1 мл/мин, IЭ: ~0 Проба: гидролизат …
Pic.31
ХФ гидролизата альбумина при одновременном градиенте ионной силы сорбент PRP-X200 (10 мкм, 200x4,6 м
ХФ гидролизата альбумина при одновременном градиенте ионной силы сорбент PRP-X200 (10 мкм, 200x4,6 мм) СР: 3 мМ NaH2PO4 + 10% CH3CN (pH 3,0), IСР: 0,1 (NaCl) Э: 10 мМ NaH2PO4 + 6 мМ Трис + 10% CH3CN …
Pic.32
Линейные восходящие градиенты рН в сильно-кислотных колонках активные компоненты стартового раствора
Линейные восходящие градиенты рН в сильно-кислотных колонках активные компоненты стартового раствора и элюента – одной природы; добавки CH3CN (~10%) в обе фазы IСР (~0,1) < IЭ (~0,3) (сочетание …
Pic.33
Выводы “Устоявшийся” метод хроматофокусирования может развиваться в следующих направлениях: 1. Предл
Выводы “Устоявшийся” метод хроматофокусирования может развиваться в следующих направлениях: 1. Предложено использовать технику хроматофокусирования и индуцирования для концентрирования и …
Pic.34
Публикации Опубликовано 80 статей, из них по теме работы - 57: 2 обзора (ЖАХ, 1999; Вестник МГУ, 200
Публикации Опубликовано 80 статей, из них по теме работы - 57: 2 обзора (ЖАХ, 1999; Вестник МГУ, 2005) 55 статей: ЖАХ – 9 ЖФХ – 14 Вестник МГУ – 24 Сорбционные процессы – 3 Fresenius J. , Mendeleev …
Pic.35
Благодарность докт. хим. наук П. Н. Нестеренко, О. А. Шпигуну; канд. хим. наук А. В. Гармашу; аспира
Благодарность докт. хим. наук П. Н. Нестеренко, О. А. Шпигуну; канд. хим. наук А. В. Гармашу; аспирантам А. Б. Тессману, М. С. Вакштейну, С. С. Кубышеву, дипл. Н. Ю. Смирновой; проф. К. Шлайсу и …
Pic.36
Индуцированные градиенты в карбоксильных колонках сорбент Macro-Prep 50 CM (50x4,6 мм) Э: 8 мМ СН3СО
Индуцированные градиенты в карбоксильных колонках сорбент Macro-Prep 50 CM (50x4,6 мм) Э: 8 мМ СН3СООН (pH 3,6), ионная сила: 1 и 3 - 0,1; 2 - ~0 ИР: 1 мл 3,25 М NH3 (рН 11), ионная сила: 1 - 1; 2 и …
Pic.37
Индуцированные градиенты в карбоксильных колонках сорбент Macro-Prep 50 CM (50 мкм, 50x4,6 мм) ИР: 1
Индуцированные градиенты в карбоксильных колонках сорбент Macro-Prep 50 CM (50 мкм, 50x4,6 мм) ИР: 1 мл [4 М CH3COONa + 1 M NaCl (1, 3)] (pH 11,9) Э: 5 мМ СН3СООН (pH 3,6), ионная сила (NaCl): 1, 2 – …
Pic.38
Разделение ионов металлов с индуцированным градиентом рН сорбент Macro-Prep 50 CM (50 мкм, 50x4,6 мм
Разделение ионов металлов с индуцированным градиентом рН сорбент Macro-Prep 50 CM (50 мкм, 50x4,6 мм) ИР: 1 мл (4 М CH3COONa + 1 M NaCl) (pH 11,9) Э: 5 мМ СН3СООН + 0,1 M NaCl (pH 3,6), 1 мл/мин …
Pic.39
Эксперимент и модель: различие в ионной силе стартового раствора и элюента (анионообменная система)
Эксперимент и модель: различие в ионной силе стартового раствора и элюента (анионообменная система) IЭ > IСР 1 - сорбент Dien-SiO2 (100-160 мкм, 0,35 мМ/г) 2 - модель Tetren-SiO2 СР -25 мМ …
Pic.40
Различие в ионной силе стартового раствора и элюента IЭ < IСР сорбент Tetren-SiO2 (7,5 мкм, 1 мМ/
Различие в ионной силе стартового раствора и элюента IЭ < IСР сорбент Tetren-SiO2 (7,5 мкм, 1 мМ/г, 250x4,6 мм) СР: 25 мМ Трис-HCl (pH 7,5), IСР: 1 - ~0,03; 2 - 0,1; 3 - 1; 4 - 0,02 Э: 2 мМ H2C2O4 …
Pic.41
Модельная смесь аминокислот сорбент Tetren-SiO2 (7,5 мкм, 50x4,6 мм) СР: 25 мМ Трис-HCl (pH 7,5), IС
Модельная смесь аминокислот сорбент Tetren-SiO2 (7,5 мкм, 50x4,6 мм) СР: 25 мМ Трис-HCl (pH 7,5), IСР: 0,02 Э: 2 мМ H2C2O4 (pH 2,9), IЭ: ~0; 1 мл/мин Детектирование - УФ (280 нм)
Pic.42
Формирование градиента рН однокомпонентными элюентами в катионообменной системе сорбент MN (5 мкм, 5
Формирование градиента рН однокомпонентными элюентами в катионообменной системе сорбент MN (5 мкм, 50x4,6 мм) СР: 10 мМ Трис-HCl (pH 7,5) Э: 1 мМ кислоты - 1 – щавелевая, 2 - винная, 3 – лимонная, 4 …
Pic.43
Как избавиться от подъема рН? сорбент MN (5 мкм, 50x4,6 мм) СР: 10 мМ Трис-HCl (pH 7,5) Э: 0,2 мМ ли
Как избавиться от подъема рН? сорбент MN (5 мкм, 50x4,6 мм) СР: 10 мМ Трис-HCl (pH 7,5) Э: 0,2 мМ лимонная кислота (pH 3,7-3,9); 1 мл/мин, ионная сила подвижных фаз: 1 - ~0; 2 - 0,01, 3 - 0,1 (NaCl)
Pic.44
Анионообменные сорбенты (для ХФ ионов металлов)
Анионообменные сорбенты (для ХФ ионов металлов)
Pic.45
Карбоксильные сорбенты (для ХФ ионов металлов) Впервые – нисходящие градиенты рН
Карбоксильные сорбенты (для ХФ ионов металлов) Впервые – нисходящие градиенты рН
Pic.46
Квази-линейные градиенты рН на сорбенте с низкой емкостью сорбент MN (5 мкм, 50x4,6 мм) СР: 2 мМ лим
Квази-линейные градиенты рН на сорбенте с низкой емкостью сорбент MN (5 мкм, 50x4,6 мм) СР: 2 мМ лимонная к-та (pH 3,0), IСР: ~0 (1 и 2), 0,05 (3 и 4) Э: 10 мМ Трис-лимонная к-та (рН 7,0), IЭ: ~0 (1 …
Pic.47
Влияние добавок ацетонитрила в условиях градиента рН сорбент PRP-X200 (10 мкм, 200x4,6 мм) СР: 5 мМ
Влияние добавок ацетонитрила в условиях градиента рН сорбент PRP-X200 (10 мкм, 200x4,6 мм) СР: 5 мМ NaH2PO4 + 20% CH3CN (pH 3,0) Э: 10 мМ NaH2PO4 + 6 мМ Трис + 20% CH3CN (рН 7,0), 1 мл/мин …
Pic.48
Влияние ионной силы в карбоксильной колонке сорбент Macro-Prep 50 CM (50 мкм, 50x4,6 мм) СР: 2 мМ ли
Влияние ионной силы в карбоксильной колонке сорбент Macro-Prep 50 CM (50 мкм, 50x4,6 мм) СР: 2 мМ лимонная к-та + 1,5 мМ Трис (pH 3,3), Э (рН 7,6): 20 мМ Трис-HCl + 5 мМ лимонная к-та; 1 мл/мин; …


Скачать презентацию

Если вам понравился сайт и размещенные на нем материалы, пожалуйста, не забывайте поделиться этой страничкой в социальных сетях и с друзьями! Спасибо!